Metadata for Sanger Sequencing

AG groups were determined by Sanger sequencing of the internal transcribed spacer (ITS) region using the ITS1F (CTT GGT CAT TTA GAG G AAG TAA) and ITS4B (CAG GAG ACT TGT ACA CGG TCC AG) primer pair (758 bp) (Gardes and Bruns 1993). Amplicons were shipped to GENEWIZ (South Plainfield, New Jersey, USA) for purification and Sanger Sequencing. Contigs were assembled using CAP3 software (Huang and Madan 1999). Taxonomy was assigned to each OTU via the NCBI BLASTn database (https://blast.ncbi.nlm.nih.gov) with criteria as 0.0 E and nucleotide match of at least 97%. <br> Gardes, M., and T. D. Bruns. 1993. ITS primers with enhanced specificity for Basidiomycetes - application to the identification of mycorrhizae and rusts. Molecular Ecology <strong>2</strong>:113-118. <br> Huang, X., and Madan, A. 1999. CAP3: A DNA sequence assembly program. Genome Res 9:868-877. <br> <br>

AG类群通过对内部转录间隔区（internal transcribed spacer, ITS）的桑格测序确定，所用引物对为ITS1F（序列：CTT GGT CAT TTA GAG G AAG TAA）与ITS4B（序列：CAG GAG ACT TGT ACA CGG TCC AG），扩增产物长度为758 bp，实验方法参考Gardes与Bruns于1993年的研究。
将扩增子送至GENEWIZ（美国新泽西州南普莱菲尔德）进行纯化与桑格测序。
使用CAP3软件组装重叠群，相关方法参考Huang与Madan于1999年的研究。
通过美国国家生物技术信息中心（NCBI）的BLASTn数据库（https://blast.ncbi.nlm.nih.gov）为每个操作分类单元（Operational Taxonomic Unit, OTU）指派分类学信息，分类标准为E值为0.0且核苷酸序列匹配度不低于97%。

Gardes, M. 与 Bruns, T. D.，1993年。《针对担子菌门具有增强特异性的ITS引物——在菌根与锈菌鉴定中的应用》，《Molecular Ecology》（分子生态学），第2卷：113-118页。

Huang, X. 与 Madan, A.，1999年。《CAP3：一款DNA序列组装程序》，《Genome Research》（基因组研究），第9卷：868-877页。