Replication data for: Influência das variantes genéticas (SNPs) e da concentração plasmática de gefitinibe nas reações adversas e sobrevida de pacientes com câncer de pulmão de não pequenas células

O carcinoma de pulmão é a principal causa de morbidade e mortalidade relacionada ao câncer no mundo, com mais de 2,2 milhões de novos casos e 1,8 de óbitos estimados para 2020. O tipo mais comum de câncer de pulmão é o câncer de pulmão de não pequenas células (CPNPC). A estratégia de tratamento no CPNPC avançado evoluiu da quimioterapia empírica para uma abordagem personalizada baseada na melhor caracterização histológica e molecular dos tumores primários do CPNPC. Apesar dos grandes avanços nas terapias direcionadas e na imunoterapia, os tratamentos quimioterápicos à base de platina continuam sendo utilizados. Nesta pesquisa, focaremos em tratamentos baseados em carboplatina combinada com paclitaxel e em gefitinibe (tratamento de NSCLC com mutação em EGFR). O uso dos derivados de platina é limitado principalmente devido a reações adversas (RAMs),como RAMs hematológicas, renais e hepáticas, e tem sido relatado na literatura a importância das variações individuais na presença e gravidade destas reações. No mesmo contexto, o uso do gefitinibe, um inibidor seletivo da tirosina-quinase do EGFR, pode levar a RAMs frequentes e graves (relatadas em mais da metade dos casos), como diarreia e erupção cutânea. A literatura sugere que existem fatores clínicos, genéticos e epigenéticos que podem estar envolvidos no desenvolvimento dessas RAMs, das quais as mais frequentes são a RAM hematológica no caso de tratamentos à base de carboplatina e paclitaxel e erupção cutânea no caso de pacientes tratados com gefitinibe. Com base neste histórico, propõem-se os seguintes objetivos gerais: 1) Identificar fatores clínicos, genéticos e epigenéticos relacionados as RAMSs induzidas por carboplatina/paclitaxel ou gefitinib em NSCLC; 2) Descrever a contribuição de miRNAs desregulados no plasma de pacientes com NSCLC na RAM hematologica induzida por carboplatina/paclitaxel e na erupção cutânea induzida por gefitinibe. Metodologia: 1) O estudo é observacional e prospectivo com estratégia de amostragem consecutiva e não probabilística. Os pacientes serão agrupados em A) grupo carboplatina + paclitaxel (sem mutação EGRF): de cada paciente serão obtidas amostras de sangue antes e 20 dias após a administração de carboplatina/paclitaxel e B) grupo gefitinibe (com mutação EGRF, que iniciam ou já fazem parte do protocolo de tratamento com Gefitinibe): de cada paciente serão obtidas amostras de sangue 30 dias após a administração de gefitinibe. Os dados clínicos e demográficos serão obtidos de todos os pacientes. As RAMs serão classificadas de acordo com os Critérios Comuns de Eventos Adversos do National Cancer Institute versão 5. A avaliação dos polimorfismos genéticos (SNPs) serão realizados por RTPCR através de ensaios de genotipagem TaqMan. A avaliação da expressão de miRNAs será realizada por sequenciamento e após a validação por RTPCR. 2) A predição de alvos será realizada utilizando o TargetScan para avaliar diferencialmente os miRNAs que se mostraram promissores no estudo in vivo, também será realizado a análise de bioinformática para avaliação de vias canônicas possivelmente envolvidas com o objetivo de avaliar as implicações da alteração da expressão de miRNA e selecionar genes alvo potencialmente relacionados as RAMs. A validação in vitro da interação miRNA-mRNA será avaliada pelo ensaio de luciferase. Ensaios funcionais in vitro serão realizados para validar a contribuição dos miRNAs no processo das RAMs. A expressão de miRNAs será modulada por superexpressão utilizando miméticos e inibidores, trabalharemos com as duas linhagens celulares de linhagem mieloide e duas de linhagem epidérmica. Os ensaios funcionais a serem avaliados dependerão do alvo relacionado aos miRNAs selecionados. Além disso, será avaliada a expressão gênica (por PCR em tempo real) e proteica (por western blot) dos genes alvo relacionados aos miRNAs validados.

肺癌是全球范围内与癌症相关的发病率与死亡率的首要病因，据估计2020年全球新增肺癌病例超220万例，死亡病例约180万。其中最常见的肺癌类型为非小细胞肺癌（non-small cell lung cancer, NSCLC）。晚期非小细胞肺癌的治疗策略已从经验性化疗，发展为基于原发肿瘤组织学与分子特征的个体化诊疗方案。尽管靶向治疗与免疫治疗已取得重大进展，含铂化疗方案仍被广泛应用。

本研究聚焦于卡铂（carboplatin）联合紫杉醇（paclitaxel），以及吉非替尼（gefitinib）的治疗方案（针对携带表皮生长因子受体（epidermal growth factor receptor, EGFR）突变的非小细胞肺癌患者）。铂类药物的临床应用主要受限于其药物不良反应（adverse drug reactions, ADRs，原文简称RAMs），包括血液学、肾毒性与肝毒性不良反应，且已有文献证实个体差异对这类不良反应的发生与严重程度具有重要影响。同理，吉非替尼作为EGFR酪氨酸激酶选择性抑制剂，其临床使用可引发频繁且严重的不良反应（半数以上病例均有报道），如腹泻与皮疹。

现有研究表明，临床、遗传及表观遗传因素可能参与这类不良反应的发生进程，其中卡铂/紫杉醇治疗相关的最常见不良反应为血液学毒性，吉非替尼治疗相关的最常见不良反应为皮疹。基于上述研究背景，本研究提出以下总体目标：
1. 明确与卡铂/紫杉醇或吉非替尼诱导的非小细胞肺癌患者不良反应相关的临床、遗传及表观遗传因素；
2. 阐明非小细胞肺癌患者血浆中失调的微小核糖核酸（microRNAs, miRNAs）对卡铂/紫杉醇诱导的血液学毒性，以及吉非替尼诱导的皮疹的调控作用。

### 研究方法
1. 本研究为观察性前瞻性研究，采用非概率连续抽样策略。将入组患者分为两组：
A. 卡铂+紫杉醇组（无EGFR突变）：采集每位患者卡铂/紫杉醇给药前及给药后20天的血液样本；
B. 吉非替尼组（携带EGFR突变，已启动或正在接受吉非替尼治疗方案）：采集每位患者吉非替尼给药后30天的血液样本。
收集所有入组患者的临床与人口统计学数据。不良反应将依据美国国家癌症研究所不良事件通用术语标准5.0版（National Cancer Institute Common Terminology Criteria for Adverse Events version 5.0, NCI CTCAE v5.0）进行分级评估。
单核苷酸多态性（single nucleotide polymorphism, SNPs）的基因分型检测将采用TaqMan探针法进行逆转录聚合酶链反应（reverse transcription polymerase chain reaction, RT-PCR）检测。微小核糖核酸的表达量检测将先通过高通量测序技术完成，随后通过RT-PCR进行验证。

2. 将使用TargetScan预测miRNA靶基因，以差异化分析本体内研究中显示出潜力的miRNAs；同时将开展生物信息学分析，以评估可能参与的信号通路，从而明确miRNAs表达异常的潜在影响，并筛选与不良反应相关的潜在靶基因。miRNA-mRNA相互作用的体外验证将采用双荧光素酶报告基因实验。
本研究将开展体外功能实验以验证miRNAs在不良反应发生过程中的调控作用：通过转染miRNA模拟物（mimetics）与抑制剂（inhibitors）实现miRNAs的过表达或敲低，实验将分别使用2株髓系细胞系与2株表皮细胞系。具体的功能实验将依据筛选得到的miRNAs对应的靶基因而定。此外，将通过实时荧光定量PCR（quantitative real-time polymerase chain reaction, qPCR）与蛋白质免疫印迹（Western Blot）分别检测经验证的miRNAs靶基因的mRNA与蛋白表达水平。