stymulacja keratynocytów wyprowadzonych ze środkowych fragmentów mieszka włosowego (2)

Celem badania była stymulacja rogowacenia keratynocytów wyprowadzonych ze środkowych fragmentów mieszka włosowego. W eksperymencie użyto mieszków włosowych, izolowanych ze skóry czterotygodniowych samic szczurów szczepu Wistar Albino Glaxo. W celu uzyskania preparatów mikroskopowych komórki wysiano przed stymulacją na jałowe szkiełka nakrywkowe w standardowej pożywce do hodowli keratynocytów. Po dwudziestoczterogodzinnej hodowli poddano je stymulacji jonami wapnia w stężeniu 1,5 mM, a następnie płukano roztworem PBS i utrwalano 4 % roztworem formaldehydu (Sigma). Po utrwaleniu hodowle płukano wodą destylowaną i barwiono roztworem hematoksyliny przez minutę. Po odlaniu barwnika szkiełka płukano wodą destylowaną, a po dziesięciu minutach wodę odlewano i dodawano roztwór eozyny na 5 minut. Po barwieniu szkiełka płukano wodą destylowaną i zabarwione komórki były odwadniane we wzrastających stężeniach alkoholi, kolejno 70 %, 95 % i 100 %. Na koniec szkiełka przepłukiwano ksylenem i zabezpieczano balsamem kanadyjskim. Preparaty fotografowano w mikroskopie świetlnym Nikon Eclipse E800 za pomocą aparatu Nikon Coolpix 995 (NIKON, Japonia). Na zdjęciach hodowle keratynocytów wyprowadzonych ze środkowych fragmentów mieszka włosowego i stymulowanych jonami wapnia w stężeniu 1,5 mM; (a) keratynocyty kontrolne, (b), (c) keratynocyty stymulowane odpowiednio przez 24 i 48 godzin; (b) keratynocyty tworzyły strukturę wielowarstwową, strzałka pokazuje nakładające się na siebie jądra komórkowe; (c) wokół jąder komórkowych kumulowały się wybarwione na ciemnofioletowo ziarna (strzałki); powiększenie 125x.