氧化还原应激信号靶蛋白质谱数据

为了检测瞬时和可逆的蛋白质巯基氧化水平，培养年轻和衰老的人成纤维细胞，用500 μM H2O2处理20 s后，立即抽吸培养基，将细胞与20 mM NEM在DPBS中孵育10 min，然后用DPBS洗涤3次，在低渗裂解缓冲液(20 mM HEPES, 2 mM EGTA和2 mM MgCl2, pH 7.4)中裂解。然后利用纯化表达的trx1 - sbp蛋白与蛋白裂解液孵育孵育2-3 h。洗脱后，将蛋白质通过电泳分离并进行质谱鉴定，比较年轻和衰老细胞响应氧化还原信号后发生氧化的蛋白质。