松萎蔫病致病新理论及应用

1、通过对我国主要松萎蔫病疫区的调查，鉴定出松材线虫携带的致病细菌的种类、优势种及其分布，测定了其致病性 发现了松材线虫与其携带的致病菌之间的互惠共生关系 首次提出并用实验验证了该病是松材线虫与其携带的致病细菌共同引起的复合侵染这一假说。 2、用电镜和光镜观察到松材线虫的体表携带了大量的细菌 测定了每条线虫的携菌量 从接种枝和非接种枝上首先分离到的主要致病菌是假单胞菌属 室内和林间的黑松接种试验均证明，松萎蔫病的诱导必须由松材线虫与其携带的致病菌共同作用才能完成。 3、建立了细菌毒素的生测方法，发明了培养发育正常的无菌松材线虫的新技术 依据此方法，首次从松材线虫携带的致病菌荧光假单胞菌中得到了具致萎作用的鞭毛蛋白和两个环二肽毒素-环（脯-酪氨酸）和-环（脯-缬氨酸），证明接种野生松材线虫的松树中存在这些毒素 初步确定鞭毛蛋白对黑松细胞的致死机理。构建了转化鞭毛蛋白基因的E. coli工程菌，“无菌松材线虫+该工程菌”的接种实验证明其诱导了黑松的萎蔫，结果证明该假说符合基因水平的科赫法则，把松萎蔫病的致病机理的研究从经典病理学水平提高到分子病理学水平，同时建立了基于鞭毛蛋白检测疫木的新方法。 4、研制了高活性的植物源天然杀松材线虫制剂--苦豆碱制剂，证实了α-三噻吩等天然化合物对松材线虫具有极强的杀灭活性，并均获国家专利 林间试验证明这些天然产物与杀细菌剂联合应用对松萎蔫病的防效达98%以上，根据新理论建立的监测和防治新技术为防控和拔除松萎蔫病疫点提供了理论和物质基础。 应用推广及效益： 1、苦豆碱等几种无公害天然杀线剂的发现为拔除疫点和防控疫区扩散提供了新的药物。 苦豆碱防治松萎蔫病研究成果于1999年被国家自然科学基金委员会评为庆祝中华人民共和国建国五十周年优秀应用推广成果项目。与内蒙古金驼药业集团合作的“内蒙古金驼药业集团总公司有毒灌草资源开发利用产业化示范工程”， 2002年被国家计委授予“高新技术产业化示范工程”。