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新型冠状病毒感染的猕猴模型

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国家非人灵长类实验动物资源库2024-09-19 更新2026-02-07 收录
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https://nhp.kiz.ac.cn/22/db
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资源简介:
将猕猴随机分为两组,通过气管内和鼻内给药接种SARS-CoV-2(106 TCID50)。病毒接种后每天检查动物的临床症状。然后用氯胺酮麻醉动物,进行相关实验,包括体温和体重监测、样本采集、胸片检查和在指定阶段进行尸检。 数据质量:a.实验动物和伦理 实该试验选用的模式生物为猕猴。该部分所有的动物实验均经过了国家昆明市高等级生物安全灵长类研究中心(伦理编号是DWSP202002001)批准,并严格按照美国国立卫生研究院的《实验动物护理与使用指南》(国家科学院出版社,第八版,2011年)进行。所有涉及猕猴的实验都经过国家昆明高等级生物安全灵长类研究中心生物安全4级(BLS-4)实验室的审查和批准。 b.实验设计 用SARS-CoV-2感染猕猴模型来评估TfR抗体(TfR AB,自制)对SARS-CoV-2感染的影响。选择6只猕猴(雄性,8岁,约8-10公斤),将它们随机分配为两组,即生理盐水组(n = 3)和TfR AB处理组(1.6 mg/kg;n = 3),通过气管内和鼻内给药接种SARS-CoV-2(106 TCID50)。病毒接种后每天检查动物的临床症状。然后用氯胺酮麻醉动物,进行相关实验,包括体温和体重监测、样本采集、胸片检查和在指定阶段进行尸检。 c.相关数据采集要求 采集体温、呼吸道拭子等数据或样本时要固定时间(每个实验日的上午10:00),固定采集人源(相同的实验人员采用相同的实验手法收集数据及样品),固定的实验流程(麻醉——检测体重——采集样本——药物处理)。 肺部样品采集要求必须从相同的肺部位置采集质量相当的组织样本进行固定、冻存或RNA提取等操作。 d.以科学规范为原则,每条数据的采集、描述与数字化表达的每个环节均由专业人员操作,保证信息准确信及科学性。实验数据源于仪器测量,逐一录入。 数据来源:a.体重数据直接从体重秤上读取,由辅助人员记录并上传。 b.RNA样品在生物安全3级(BLS-3)实验室提取,与昆明动物研究所通过qRTR-PCR检测相关数据。使用TRIzol试剂(15596018,Invitrogen,美国)提取细胞内的病毒RNA,用于实时定量荧光PCR(qRT-PCR)检测。qRT-PCR的具体方法如文章所述。选用的试剂盒是Thunderbird Probe One-step qRT-PCR Kit(QRZ-101,TOYOBO,日本),引物和探针序列如下。 SARS-CoV-2-Forward:5'-GGGGAACTTCTCCTGCTAGAAT-3', SARS-CoV-2-Reverse:5'-CAGACATTTTGCTCTCAAGCTG-3', SARS-CoV-2-Probe:5'-FAM-TTGCTGCTGCTTGACAGATT-TAMRA-3'。 c.HE病理染色和免疫组化染色:应选取肺部相同位置进行固定,切片后经过HE染色和anti-spike染色染色分析感染后第7天所有猕猴肺部切片的组织病理学变化。 数据生产方式:相关数据主要使用SPSS、Excel和GraphPad Prism 9计算和统计。 从独立实验中获得的多个数据以“平均值± SEM”进行展示。Kolmogorov-Smirnov检验(K-S检验)用于分析正态分布,然后使用单因素方差分析进行数据分析,如果同时测量2个因素的影响,则使用双因素方差分析,对P值进行Dunnett或Bonferronit调整。如果只比较2个组,则采用非配对t检验,置信区间为95%。差异在P < 0.05时被认为是显著的(P < 0.05以*表示,P < 0.01以**表示,P < 0.001以***表示)。 时间范围:2020年02月至12月至2024年2月
提供机构:
中国科学院昆明动物研究所
创建时间:
2024-09-19
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