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Prf1（Perforin1）基因又称Pfn、Pfp，编码穿孔素蛋白。穿孔素（PRF，PRF1）是一种必需的成孔蛋白，由细胞毒性T淋巴细胞（CLs）细胞和CD8+T细胞表达并释放到靶细胞接触的位点，在那里低聚形成靶细胞膜上的孔，允许扩散一系列诱导细胞凋亡的丝氨酸蛋白酶、颗粒酶，进入靶细胞[1-2]。研究表明，穿孔素是参与细胞毒性细胞杀伤靶细胞的一个重要分子，在免疫监视、免疫调控中起着重要作用，其功能异常可导致多种疾病。国内外大量分子遗传学研究提示Prf1基因突变可引起家族性噬血细胞综合征（FHL）、噬血性淋巴组织细胞增生症（HLH）、Ⅰ型糖尿病、多发性硬化症和恶性血液肿瘤等疾病[3-5]。临床实验中，Prf1蛋白通过产生和输送CLs维持免疫稳态和肿瘤免疫监视[1]。Prf1基因突变纯合子病人的NK细胞、CD8+T细胞和CD56+T细胞功能正常，CLs功能减少，不能清除淋巴细胞性脉络丛脑膜炎病毒，消除纤维肉瘤细胞的效率降低。目前的研究主要集中在Prf1基因突变与FLH、HLH等疾病的关系，以期发现能够揭示FLH、HLH病因、临床诊治及预后有意义的分子生物学标志。我们构建针对mouse Prf1基因exon2的sgRNA，利用CRISPR/Cas9技术和囊胚注射技术，把特异性的sgRNA注射到受精卵中，sgRNA介导Cas9核酸内切酶切割靶向exon2，并导致DNA双链断裂，通过非同源末端重组的方式修复断裂的Prf1基因，最后Prf1基因在exon2上删除161bp碱基，导致移码而被破坏。通过PCR技术进行基因分型，然后进行序列分析，筛选的Prf1基因突变小鼠，将成为研究人类免疫缺陷疾病、糖尿病的动物模型。研发项目编号：XM001596，该项目获得两条line，此line通过表型分析验证。另一条line编号为T001181。