DLP打印角膜的透光率数据

采集方案：根据设计的配方，将不同浓度（%w/v）的NAGA和GelMA溶解在DPBS中。然后将0.25%光引发剂、苯基锂（2,4,6-三甲基苯甲酰基）膦酸锂和0.05%紫外线吸收剂加入溶液中，以诱导和保护光交联。使用DLP打印设备进行角膜支架的3D生物打印。将整个打印系统放置在生物安全柜中，使用75%酒精和紫外线消毒，在打印前，将混合生物墨水加热至37℃以完全溶解，涡旋混合数分钟以完全混合，并用0.22μm过滤器过滤以进行适当消毒。完成DLP生物打印后，在标准细胞培养条件下将PNG角膜支架转移到组织培养板中的无菌DPBS中。分别使用紫外-可见分光光度计和阿贝折光仪（n=3），将PNG生物墨水打印成10×40×0.5mm条用于测量透光率和15×35×0.5mm条带用于测量RI。在进行两种光学表征之前，将PNG试纸条浸入37℃的DPBS（pH=7.4）中直至完全水合，DPBS用作空白对照。使用630nm波长的单色光测量透光率。对于屈光测试，将PNG条放置在样品棱镜之间，以便在室温下读取RI值。
依据GB/T16886.5-2017《医疗器械生物学评价-第5部分：体外细胞毒性试验》。将L-929细胞培养在含10%胎牛血清和抗生素（青霉素100IU/mL，链霉素100μg/mL）的MEM培养液中，置于37℃，5%CO2培养箱中培养。用0.25%胰酶（含EDTA）消化细胞制备成单细胞悬液，细胞悬液离心（1000rpm，5min），然后将细胞重新分散于培养基中，调整细胞密度为1×105个/mL的细胞悬液；接种上述细胞悬液到1个96孔培养板中，每孔100μL，置于培养箱中（5%CO2，37℃）培养24h，至形成半汇合单层，吸出原来的培养液，分别加入100μL不同浓度的试验样品浸提液、空白对照液、阳性对照（100%）和阴性对照液（100%），37℃、5%CO2培养24h。每组做6个平行；浸提液与细胞接触培养24h后，显微镜下观察细胞形态。相对空白对照组，阳性对照组细胞形态异常无光泽；阴性对照组细胞形态完整，贴壁紧密；样品组细胞不超过20%的细胞呈圆缩、疏松贴壁、无胞浆内颗粒或显示形态学方面的变化，偶见细胞溶解，仅观察到轻微的细胞生长抑制现象，无明显细胞毒性反应。弃去培养板孔中的培养液，每孔中加入50µL质量浓度为1mg/mLMTT培养基溶液。继续培养2h后，弃去孔内MTT培养基溶液，每孔分别加入l00µL异丙醇，平置于振荡器上振荡10min,使孔内溶液颜色均匀，在酶标仪570nm波长下测定吸光度OD值，计算细胞存活率。
依据GB/T16886.4-2022《医疗器械生物学评价-第4部分：与血液相互作用试验选择》。采用直接接触法进行试验。试验组、空白对照组、阴性对照组和阳性对照组的无菌离心管每组准备3只。取浓度在10mg/mL土1mg/mL范围内的稀释血1mL，分别加入上述准备好的无菌离心管中，混合均匀，盖好盖子后，放入37°C恒温培养振荡器中3h,期间每隔30min颠倒翻转一下离心管以保证材料与红细胞充分接触。将离心管从37°C恒温培养振荡器中取出，于800g条件下离心15min。小心吸取各管离心后的上清液1mL，分别加入1mLHiCN试剂混匀，放置5min，以HiCN试剂为空白，测定吸光度值。酶标仪(Tecan;InfiniteF200Pro)检测540nm波长处吸光度。
依据GB/T16886.10-2017《医疗器械生物学评价-第10部分：刺激与皮肤致敏试验》。使用极性浸提介质（0.9%氯化钠溶液）和非极性浸提介质（芝麻油）浸提检测样品。将每份浸提液皮内注射到10只测试组豚鼠，随后进行敷贴。同样地，将每份空白浸提介质皮内注射到5只对照组豚鼠，随后进行敷贴。恢复后，分别对测试组和对照组的豚鼠贴上含有检测样品浸提液和对应空白浸提介质的激发敷贴。敷贴去除后，分别于24小时和48小时记录敷贴部位的得分。由不同实验人员观察

敷贴试验反应分级
无明显变化0
散发性或斑点状红斑1
中度融合性红斑2
重度红斑和/或水肿3

GB/T16886.11-2021《医疗器械生物学评价-第11部分：全身毒性试验》。分别使用极性浸提介质（0.9%氯化钠溶液）和非极性浸提介质（芝麻油）浸提检测样品。将每种单剂量的浸提液注射到一组5只实验动物体内（测试组）。同样地，将每种空白浸提介质分别注射到另一组5只动物中（对照组）体内。注射前和注射后24、48和72小时进行称重。注射后立即并分别在4、24、48和72小时内观察小鼠全身毒性。观察过程中，如果没有出现经过浸提液注射的小鼠不良反应大于相应的对照组动物，检测样品符合要求。如果2只或多只动物死亡或出现不正常反应，如抽搐或虚脱，或如果3只或多只动物体重下降超过10%，那么检测样品不符合实验要求。由不同实验人员观察下表项目

临床观察观察症状
呼吸呼吸困难（腹式呼吸、气喘）、呼吸暂停、紫绀、呼吸急促、鼻流液
肌肉运动嗜睡减轻或加重、扶正缺失、感觉缺乏、全身僵硬、共济失调、异常运动、俯卧、震颤、肌束抽搐
痉挛阵挛、强直、强直性阵挛、昏厥、角弓反张
反射角膜、翻正、牵张、对光、惊跳反射
眼症状流泪、瞳孔缩小/散大、眼球突出、上睑下垂、混浊、虹膜炎、结膜炎、血泪症、瞬膜松弛
心血管症状心动过缓、心动过速、心律不齐、血管舒张、血管收缩
流涎过多
立毛被毛粗糙
痛觉丧失反应降低
肌肉状态张力减退、张力亢进
胃肠软便、腹泻、呕吐、多尿、鼻液溢
皮肤水肿、红斑
设备情况：紫外/可见分光光度计(GENESYS180,ThermoFisherScientific)；酶标仪(Tecan;InfiniteF200Pro)。数据大小：30MB。