松材线虫病病原确立和防控新技术研究与推广

松材线虫病（Bursaphelenchus xylophilus）又称松树萎蔫病，是松树上的毁灭性病害，松树一旦染病，结果便是死亡。该病防治一直是个世界难题。项目围绕松材线虫病病原和致病机制等重要科学问题及病害防控关键技术开展创新研究，取得成果如下： 1.创建无菌松材线虫致病性测定体系，明确松材线虫的病原性通过收集松材线虫卵并经过表面消毒、孵化、纯培养以及NA和16srRNA的无菌化检验等系列步骤，建立无菌松材线虫培养体系 构建了松材线虫与松树互作无菌实验平台。明确了无菌松材线虫可致松树萎蔫，确立了松材线虫的致病性。 2.发现松材线虫致病相关的重要基因功能 通过基因组表达芯片筛选了松材线虫与寄主互作中的致病相关基因，采用 RNA 干扰技术对相关基因功能研究，表明过氧化物酶、果胶酶和细胞色素氧化酶等基因经RNA 干扰后显著降低了松材线的致病力。筛选并获得了对松材线虫致病性具有显著调控作用的miRNA。从分子水平证实了松材线虫是松树萎蔫病的病原。 3.首次发现松材线虫体内存在细菌，分析了体内细菌与线虫繁殖和毒力的关系松材线虫体内细菌对松材线虫的生长、发育和致病力具有一定的调控作用，但这些细菌不会从根本上改变松材线虫的致病性。 4.揭示了氮氧自由基介导的信号通路是寄主松树抵抗线虫侵染的重要防御机制 发现在松材线虫与寄主互作中，NO 作为H2O2 上游信号分子，通过调控抗氧化保护酶系统及苯丙烷代谢途径，介导了松树对松材线虫侵染的应答反应，影响了病程发展。 5.创新研发松材线虫专项自动化分子检测系统 完成世界上首台松材线虫专项自动化分子检测系统研制。实现对松木样品中松材线虫直接检测和检测过程及结果判读自动化。 6.首创松材线虫恒温扩增试纸条判读检测技术 将交叉引物恒温扩增技术与以免疫学为基础的试纸条检测技术相结合，首创了松材线虫试纸条检测技术。该技术快速、准确、检测设备一次性投入低，实现检测技术的普及化应用。 7.创新研发松墨天牛特异光源引诱技术 采用昆虫视网膜电位技术筛选出针对松墨天牛成虫的特异性光谱，研发基于单色LED发光器的特异性光源诱虫灯。不仅能诱捕产卵期天牛，还能诱捕补充营养期天牛。