林木幼苗猝倒病之PCR檢測技術建立

幼苗猝倒病為林木苗圃最嚴重的病害，危害幼苗根部並造成植株猝倒死亡，此病害主要由四個屬的真菌所引起，分別為立枯絲核菌（Rhizoctonia
solani）、腐霉病菌（Pythium spp.）、疫菌（Phytophthora spp.）及鐮孢菌（Fusarium
spp.）。本實驗為能同時且快速檢測以上4種幼苗猝倒病之真菌病原，設計4組專一性引子對並配合聚合?鏈鎖反應 (
Polymerase chain reaction, PCR
)，使4種病原真菌之PCR檢測流程能於相同之反應條件下進行。其中，腐霉病菌、疫菌、鐮孢菌三屬真菌從已發表的文獻中搜尋適當的引子對，經過測試分析後分別選用可於黏合溫度56℃進行PCR之引子對，腐霉病菌選用Pa3與ITS4為引子對，增幅片段為385
bp ; 疫菌以FMPh-8b及FMPh-10b為引子對，增幅片段為457 bp ;
鐮孢菌以ITS-Fu-f與ITS-Fu-r為引子對，增幅片段為389
bp；而立枯絲核菌則選擇保守性高之基因片段Succinyl-CoA設計適合上述PCR條件下反應之新引子對R.S-F與R.S-R，經測試可對立枯絲核菌增幅出700 bp之特異性PCR片段。此4對引子經專一性測試，每對引子皆能準確針對目標菌種進行增幅，且不對非目標病原反應，具高度專一性。由於此4對專一性引子對，其黏合溫度相同，且所增幅之PCR片段長度接近，故可同時於一臺PCR機器進行增幅，使PCR偵測更為省時便利。此技術目前已應用在林木幼苗根部及土壤病原檢測，每對引子皆可專一的增幅出特定片段。由於此4種病原菌為幼苗常見之病害，在未來推展健康林苗檢疫制度時，可應用在林苗猝倒病簡易、快速及高敏感之檢測。