通过内源性ROS触发交联剂释放以靶向分析线粒体蛋白质构象和相互作用的研究数据

靶向线粒体的活性氧响应型交联剂递送纳米颗粒用于原位分析线粒体蛋白动态构象与相互作用，线粒体蛋白质的原位构象与相互作用研究对于理解其生物学功能至关重要。目前的化学交联质谱技术难以对未经基因修饰的细胞线粒体蛋白进行深入分析。为此，本研究开发了一种靶向线粒体的活性氧响应型交联剂递送纳米颗粒。该纳米颗粒集成了线粒体靶向模块三苯基膦、ROS响应模块硫缩酮、载体模块聚乳酸-羟基乙酸共聚物和聚乙二醇，以及交联剂模块二琥珀酰亚胺辛二酸酯。在靶向线粒体后，ROS触发的交联剂释放提高了线粒体内原位交联的覆盖度。本研究在HepG2细胞中共鉴定出572个线粒体蛋白质上的2103个交联位点。其中，1718个分子内交联揭示了涉及伴侣蛋白的ATP依赖性构象循环动态变化，385个分子间交联揭示了涉及OXPHOS复合物的动态相互作用以及27对可能的潜在互作关系。这些结果表明，R-CDNP能够实现活细胞内线粒体蛋白质动态构象与相互作用的分析，从而有助于更好地理解其生物学功能。