Development and Specificity Evaluation of a Rabbit Polyclonal Antibody against Tri-site (R2/R8/R17) Citrullination on Histone H3 Based on a Peptide Immunization Strategy

目的： 制备靶向组蛋白H3多位点瓜氨酸化（R2、R8、R17）的兔多克隆抗体，并利用多平台技术综合评价其特异性。 方法：对组蛋白H3（含R2、R8、R17残基）的N端1-19氨基酸序列进行生物信息学分析。瓜氨酸肽（R2cit、R8cit、R17cit）和相应的非瓜氨酸化对照肽的化学合成。肽偶联到锁孔帽贝血蓝蛋白 （KLH） 用于新西兰白兔的免疫。ELISA检测抗体滴度。通过点印迹、蛋白质印迹和细胞免疫荧光染色进行特异性验证。结果：抗血清滴度达到1：256000。蛋白A纯化的抗体纯度为>90%。特异性测定证实其对 R2/R8/R17 瓜氨酸化的组蛋白 H3 的特异性识别，与未修饰的肽或野生型组蛋白 H3 没有交叉反应。结论：采用多肽免疫策略成功制备了能够特异性检测组蛋白H3多位点瓜氨酸化（R2、R8、R17）的兔多克隆抗体。这些抗体适用于基础研究应用。