2008-2010年贵州喀斯特适生植物的碳酸酐酶作用机制的数据库

碳酸酐酶活性的测定：取植物叶片0.3～1g，放到预冷的研钵中，迅速加入液氮，再加入3mL巴比妥缓冲液(10mmol/L，含巯基乙醇50mmol/L，pH8.3)进行研磨，取研磨液倒入5mL离心管中，离心管置于冰浴中20min后，在13000r/min下离心5min，取上清液，冷藏待测。碳酸酐酶活力的测定或采用常规pH计法。保持反应系统在0～2℃，取待测上清液50～1000μL，加入到含15mL的巴比妥缓冲液(20mmol/L，pH8.30)的反应容器中，然后迅速加入10mL预冷的(0～2℃)饱和CO2的蒸馏水，用pH电极监测反应体系pH值变化，记下pH值下降一个单位(例如pH值从8.2～7.2)所需的时间，记为t，同时记录在酶失活条件下pH值下降一个单位所需的时间，记为t0，酶的活力用WA-unit表示。WA =t/t0-1。（碳酸酐酶活力1的数据）碳酸酐酶活力的测定或采用自制的pH锑微电极。保持反应系统在0~2℃，取待测上清液10~300？L， 加入到含3mL的巴比妥缓冲液(20mmol/ L ，pH8.30) 的反应容器中，然后迅速加入2mL预冷的(0~2℃) 饱和CO2的蒸馏水，用锑微电极监测反应体系pH值变化，采用电化学工作站（CHI660C，上海辰华仪器公司）开路电位法记录下反应过程中电位值的改变，同时记录下在酶失活条件下整个反应过程的电位值改变。保存下电位随时间变化的过程曲线。通过该时间电位曲线得到酶存在和酶失活条件下单位pH下降的时间t1和t0，酶的活力用WA-unit表示，WA =t/t0-1。（碳酸酐酶活力2的数据）