ALK mutants bind SHC

Early studies with the NPM-ALK fusion identified two putative consensus sequences for phosphotyrosine binding proteins such as SHC. Coimmunoprecipitation studies in NIH 3T3 cells determined that the predominant SHC binding site is at tyrosine 567 (equivalent to Y1507 in the full length protein). SHC is tyrosine phosphorylated and associated with both NPM-ALK and GRB2 in these cells (Fujimoto et al, 1996). SHC has also been demonstrated to be a target of ALK-mediated phosphorylation in ALK-amplified neuroblastoma cells (Miyake et al, 2002). Mutation of the Y567 binding site to F abrogates the binding of SHC to the fusion protein, but does not eliminate the transforming activity of the protein, suggesting that SHC binding is not essential to cellular transformation (Fujimoto et al, 1996). SHC has also been shown to bind to other ALK fusions, including those with TFG, ATIC and FN1 and to contribute to signaling and transformation to various extents (Hernandez et al, 2002; Trinei et al, 2000; Ren et al, 2012; Okubo et al, 2012; Cazes et al, 2013reviewed in Hallberg and Palmer, 2013; Hallberg and Palmer, 2016; Roskoski, 2013)

早期对NPM-ALK融合的研究揭示了两种潜在的共识序列，这些序列与磷酸化酪氨酸结合蛋白，如SHC相关。在NIH 3T3细胞中的共免疫沉淀研究表明，SHC的主要结合位点位于酪氨酸567（相当于全长蛋白中的Y1507）。在此细胞中，SHC发生酪氨酸磷酸化，并与NPM-ALK以及GRB2相关联（Fujimoto等人，1996年）。此外，SHC已被证实是ALK介导的磷酸化的靶点，在ALK扩增的神经母细胞瘤细胞中（Miyake等人，2002年）。将Y567结合位点突变至F，可以消除SHC与融合蛋白的结合，但并不消除蛋白的转化活性，这表明SHC的结合并非细胞转化的必要条件（Fujimoto等人，1996年）。SHC还被发现可以结合其他ALK融合，包括与TFG、ATIC和FN1的融合，并在不同程度上参与信号传导和转化（Hernandez等人，2002年；Trinei等人，2000年；Ren等人，2012年；Okubo等人，2012年；Cazes等人，2013年，参见Hallberg和Palmer，2013年；Hallberg和Palmer，2016年；Roskoski，2013年）