林木褐根病單元抗體診斷試劑製備

樹木褐根病是台灣重要樹木病害之一，由擔子菌Phellinus noxius所引起，每年許多珍貴樹種皆因受到褐根病為害而枯死。根據褐根病菌的病原性及寄主範圍研究，得知其寄主範圍極廣，而病原菌在自然界鮮少形成子實體，因此不易初期即可正確診斷，必須仰賴植病專業人員，經病菌分離培養來加以鑑定，每每造成林木疫情之延誤。本研究應用融合瘤 (hybridoma)技術，開發對褐根病菌具專一性之單元抗體，應用於間接酵素免疫反應 (indirect ELISA)，提供一套褐根病快速診斷方法。研究過程包括褐根病菌的抗原製備、Balb/c小老鼠的免疫注射、細胞融合及融合瘤細胞篩選等。目前初步共篩選出有1252細胞株對褐根病菌呈正反應者，再利用與褐根病菌相似的菌株Ganoderma與Phellinus gilvus進行交叉反應，篩選出針對褐根病菌具高專一性的抗體細胞株，結果共獲得152株。另外，將已篩選出高專一性融合瘤細胞注射小白鼠，共得到抗腹水6株，抗腹水之力價測試可達到 10 -15，並表現出對褐根病菌的菌絲呈專一性反應。抗腹水經通過親和性層析管柱，進行單元抗體純化，並將已純化單元抗體，直接應用於病根部組織的ELISA測試，亦表現出此單元抗體對病根組織呈專一性反應；對照組健康根部組織則不反應。此方法可應用於罹病根部的快速檢測，僅需取0.5克根部組織磨碎及溶在1毫升水中，再用紗布過濾之濾液即可鑑定有無褐根病菌感染。未來本單元抗體將進一步製成膠金標誌檢測試劑（colloidal gold-labeling kit），以提供更方便且不需儀器的林木褐根病快速診斷法。