Mechanismy podílející se na regulaci PD-L1
收藏资源简介：
Experimenty budou prováděny na melanomových buněčných liniích a stabilních liniích s upravenou signalizační dráhou p53/MDM2 a IFITM. Budeme identifikovat změny povrchového proteomu a sekretomu v závislosti na genetických změnách v nádorových buňkách. K tomu budou využity metody založené na biotinylaci povrchových buněčných proteinů pomocí Sulfo-NHS-SS-Biotinu a na in situ biotinylaci sekretovaných proteinů v endoplazmatickém retikulu buněk exprimujících Sec61b-TurboID. Tyto metody budou následně propojeny s hmotnostně spektrometrickou (MS) analýzou, která umožní detailní identifikaci a kvantifikaci značených proteinů. Pro kvantifikaci změn v povrchovém proteomu (surfaceomu) využijeme buď metodu pulse SILAC (Stable Isotope Labeling with Amino acids in Cell culture). Výsledky z hmotnostně spektrometrické analýzy budou ověřeny pomocí metod FACS, Western blot, ELISA a imunofluorescence. Zaměříme se na checkpoint molekuly a další molekuly regulující imunitní odpověď. Budeme zkoumat, jak zacílené povrchové proteiny a modifikované signální dráhy ovlivňují funkci NK a T buněk v kokultivačních experimentech, což nám umožní modelovat přímou interakci mezi imunitními a nádorovými buňkami.
