可用于人肝细胞移植的新型猪品系的建立

（1）在获得的两个基因敲除的模型猪的基础上进一步对其他基因进行敲除，获得FRG细胞系。
运用之前确认具有较高敲除效率和敲除稳定基因型的Cas9，通过一细胞期体内胚注射获得FAH、IL2RG和RAG基因敲除猪30天胎儿，建立胎儿成纤维细胞系，通过基因型鉴定，然后运用细胞转染Cas9，进一步对胎儿成纤维细胞系进行敲除直到获得FRG三基因敲除细胞系；
同时对之前出生的，经过基因型和表型鉴定的FG两基因敲除克隆猪，建立成纤维细胞系，然后通过细胞转染Cas9对RAG基因进行进一步敲除，获得FRG三基因敲除细胞系；
第三种方案是对之前出生的，经过基因型和表型鉴定的RG两基因敲除克隆猪，建立成纤维细胞系，然后通过细胞转染Cas9对FAH基因进行进一步敲除，获得FRG三基因敲除细胞系。
（2）对获得的FRG三基因敲除细胞系进行克隆，获得FRG克隆猪。对其肝损伤和免疫缺陷表型进行分析。
分别对以上方案获得的细胞系通过大量的克隆获得FRG三基因敲除克隆猪，针对FRG模型评估其免疫缺陷水平和肝肾损伤水平，研究该模型猪的生长和发育情况，初步评估其作为人肝细胞的受体的可能性。
（3）对表型符合预期、存活良好的FRG克隆猪进行耳缘成纤维细胞系建系，获得稳定可靠的FRG细胞系。
对上述已经获得模型并确认表型符合预期的模型猪进行进一步的细胞系保种和扩繁，为肝人源化受体猪的大量制备奠定基础。