非天然氨基酸光敏蛋白还原SAM自由基酶活性数据集

我们研究非天然氨基酸插入的人工光敏蛋白PSP2/NADH光照还原系统可以在温和的条件下高效还原SAM自由基酶的铁硫簇，拓宽了与SAM自由基酶具有更高相容性的还原剂种类，实现丁酰苷菌素、白喉酰胺、罗氏菌素和1,3-丙二醇等生物合成关键SAM自由基酶的原位可控还原。通过基因密码子扩展技术，在黄色荧光蛋白第 66位酪氨酸(Tyr,Y)光敏非天然氨基酸二苯甲酮-丙氨酸(BpA)，进一步获得三重突变体 PSP2。选取来自不同天然产物生物合成通路的SAM自由基酶BtrN，Dph2，GDAE 等在大肠杆菌中进行异源表达。通过紫外光谱检测光敏蛋白对SAM自由基酶的还原情况；通过高效液相色谱检测被还原的SAM自由基酶切割SAM反应情况；用高效液相色谱-质谱联用仪检测别还原SAM催化天然底物获得产物的活性。