Supproting Materials for "Cross-Linked Selenoctanoic Acid Nanoplatform Enables Bidirectional Regulation of Intra- and Extracellular ROS: A New Avenue for Enhanced Cancer Immunotherapy" - section A

Table of Content

1.     Synthesis and characterization

            1.1.     SeLA

                      1.1.0.     Lab book pages

                      1.1.1.     NMR

                      1.1.2.     HR-MS

                      1.1.3.     UV

                      1.1.4.     IR

            1.2.     cSeLAN

                      1.2.0.     Lab book pages

                      1.2.1.     NMR

                      1.2.2.     UV

                      1.2.3.     IR

                      1.2.4.     GPC

                      1.2.5.     MALDI-TOF-MS

                      1.2.6.     DLS

                      1.2.7.     Critical melle cncentration

                      1.2.8.     ICP-MS

                      1.2.9.     TEM

            1.3.     cLAN

                      1.3.0.     Lab book pages

                      1.3.1.     NMR

                      1.3.2.     UV

                      1.3.3.     DLS

                      1.3.4.     GPC

2.     In vitro intra- and extracellular ROS regulation

            2.0.     Lab book pages

            2.1.     Raman scattering spectra

            2.2.     HPLC

                      2.2.1.     Standard peaking

                      2.2.2.     HPLC analysis

            2.3.     ICP-MS

            2.4.     MTT

            2.5.     Intracellular ROS generation

                      2.5.1.  Fluorescence images

                      2.5.2.  Flow fluorescence quantification

            2.6.     Intracellular pro-oxidation mechanism

                      2.6.1.  Quantification of intracellular ATP

                      2.6.2.  Quantification of intracellular NADH

                      2.6.3.  Quantification of intracellular ·OH

                      2.6.4.  Quantification of intracellular ROS

            2.7.     Quantification of extracellular ROS

3.     In vitro ICD-inducing ability

            3.0.   Lab book pages

            3.1.     ATP release

            3.2.     HMGB1

            3.3.     CRT

4.     T cell proliferation and activation

            4.0.   Lab book pages

            4.1.     Flow cytometry analysis of the T cell proliferation

            4.2.     Quantification of IFN-γ secretions

5.     Biosafety evaluation of cSeLAN

            5.0.       Lab book pages

            5.1.       Hemolytic and hemagglutination assay

                      5.1.1.  Hemolytic assay

                      5.1.2.  Hemagglutination assay

            5.2.       Acute toxicity test

                      5.2.1.  The amounts of dead mice

                      5.2.2.  Body weight of mice

                      5.2.3.  Hematological assay

                      5.2.4.  Blood biochemistry

                      5.2.5.  H&E staining of main organs

6.     Pharmacokinetic evaluation of cSeLAN

           6.0.   Lab book pages

           6.1    Pharmacokinetic evaluation of cSeLAN

7.     In vivo anti-tumor immune response

           7.0.   Lab book pages

           7.1.   Chemiluminescence images

                    7.1.1.  Chemiluminescence images of isoluminol

                    7.1.2.  Chemiluminescence images of luminol

                    7.1.3.  Related quantifications upon various treatments

           7.2.   Immunofluorescence images

           7.3.   T cell proliferation

           7.4.   DC proliferation

8.     In vivo anti-tumor efficacy

           8.0.   Lab book pages

           8.1.   Tumor growth

                    8.1.1.  Tumor volume

                    8.1.2.  Tumor weight

                    8.1.3.  Tumor images

           8.2.   Body weight

           8.3.   Lung tissues with metastatic nodules

                    8.3.1.  Lung tissues images

                    8.3.2. Number of pulmonary metastatic nodules

                    8.3.3.  H&E

           8.4.   H&E of tumor and main organs

           8.5.   Cytokine secretions

           8.6.   Kaplan−Meier survival curves

9.     In vitro NK cytotoxicity and activity

           9.0.   Lab book pages

           9.1.   NK cytotoxicity

           9.2.   NK activity