生物3D同轴打印构建血管支架形貌数据

采集方案：通过光引发自由基共聚制备Clay/NAGA/GelMA水凝胶（CNG水凝胶）。将不同浓度（w/v）的NAGA、Clay和GelMA溶解在去离子水中。然后将1%光引发剂Irgacure1173（相对于单体的总重量）加入溶液中以诱导光交联。随后，将混合物浇铸到塑料矩形模具（长200毫米，宽100毫米，厚1.5毫米）中，并在交联炉中聚合40分钟。简单表达，所得水凝胶命名为CNGX-Y，其中C、N和G分别代表纳米粘土、NAGA和GelMA。X表示1mL水中粘土单体的重量，间接表示水凝胶的固体含量，Y表示单体质量比（WNAGA/WGelMA）。为了制造微管，设计了一个两层同轴喷嘴。通过将芯针（25G）插入壳针（17G）来组装同轴喷嘴，并使用焊接固定连接。同轴针的尺寸可以通过改变内外径的针尺寸来改变，如12G/16G、13G/16G、14G/16G、18G/22G、15G/22G、17G/27G、17G/23G、21G/25G、20G/23G、20G/25G、22G/32G等。所得同轴喷嘴在使用前用乙醇和去离子水清洁。在室温下通过Bioplotter气动分配系统使用同轴针头生产微管。在100-350kPa的压力范围内，将外部喷嘴与CNG100-Y（Y=5：5、7：3、9：1）墨水连接，其中可以调整同轴喷嘴的尺寸以控制微管的直径。然后，将CNG100-Y（Y=5：5、7：3、9：1）微管暴露在紫外光下40min绘制到载玻片中。通过扫描电子显微镜拍摄SEM图像。
依据GB/T16886.5-2017《医疗器械生物学评价-第5部分：体外细胞毒性试验》。将L-929细胞培养在含10%胎牛血清和抗生素（青霉素100IU/mL，链霉素100μg/mL）的MEM培养液中，置于37℃，5%CO2培养箱中培养。用0.25%胰酶（含EDTA）消化细胞制备成单细胞悬液，细胞悬液离心（1000rpm，5min），然后将细胞重新分散于培养基中，调整细胞密度为1×105个/mL的细胞悬液；接种上述细胞悬液到1个96孔培养板中，每孔100μL，置于培养箱中（5%CO2，37℃）培养24h，至形成半汇合单层，吸出原来的培养液，分别加入100μL不同浓度的试验样品浸提液、空白对照液、阳性对照（100%）和阴性对照液（100%），37℃、5%CO2培养24h。每组做6个平行；浸提液与细胞接触培养24h后，显微镜下观察细胞形态。相对空白对照组，阳性对照组细胞形态异常无光泽；阴性对照组细胞形态完整，贴壁紧密；样品组细胞不超过20%的细胞呈圆缩、疏松贴壁、无胞浆内颗粒或显示形态学方面的变化，偶见细胞溶解，仅观察到轻微的细胞生长抑制现象，无明显细胞毒性反应。弃去培养板孔中的培养液，每孔中加入50µL质量浓度为1mg/mLMTT培养基溶液。继续培养2h后，弃去孔内MTT培养基溶液，每孔分别加入l00µL异丙醇，平置于振荡器上振荡10min,使孔内溶液颜色均匀，在酶标仪570nm波长下测定吸光度OD值，计算细胞存活率。
依据GB/T16886.4-2022《医疗器械生物学评价-第4部分：与血液相互作用试验选择》。采用直接接触法进行试验。试验组、空白对照组、阴性对照组和阳性对照组的无菌离心管每组准备3只。取浓度在10mg/mL土1mg/mL范围内的稀释血1mL，分别加入上述准备好的无菌离心管中，混合均匀，盖好盖子后，放入37°C恒温培养振荡器中3h,期间每隔30min颠倒翻转一下离心管以保证材料与红细胞充分接触。将离心管从37°C恒温培养振荡器中取出，于800g条件下离心15min。小心吸取各管离心后的上清液1mL，分别加入1mLHiCN试剂混匀，放置5min，以HiCN试剂为空白，测定吸光度值。酶标仪(Tecan;InfiniteF200Pro)检测540nm波长处吸光度。设备情况：荧光显微镜(奥林巴斯；IX73)；酶标仪(Tecan;InfiniteF200Pro)。数据大小：50MB。