Table A 2 in Leaving no stone unturned: three additional new species of Atractus ground snakes (Serpentes, Colubridae) from Ecuador discovered using a biogeographical approach

Table A2. List of PCR and sequencing primers and their respective PCR conditions (denaturation, annealing, extension, and number of corresponding cycles) used in this study. All PCR protocols included an initial 3-min step at 94 °C and a final extension of 10 min at 72 °C.
LocusPrimerSequence (5 ’-3’)ReferencePCR profile16S16Sar-LCGCCTGTTTATCAAAAACATPalumbi et al. (1991)30 cycles of 94 °C (45 sec), 53 °C (45 sec), 72 °C (1 min)16Sbr-H-RCCGGTCTGAACTCAGATCACGTCytbL14910GACCTGTGATMTGAAAACCAYCGTTGTBurbrink et al. (2000)94 °C (1 min), 58 °C (1 min), 72 °C (2 min) [x30-36]H16064CTTTGGTTTACAAGAACAATGCTTTAND4ND4CACCTATGACTACCAAAAGCTCATGTAGAAGCArévalo et al. (1994)94 °C (25 sec), 56 or 60 °C (1 min), 72 °C (2 min) [x25-30]LeuCATTACTTTTACTTGGATTTGCACCAS78CCTTGGGTGTGATTTTCTCACCT

表A2。本研究使用的聚合酶链式反应（Polymerase Chain Reaction，PCR）与测序引物清单，及其对应PCR反应条件（涵盖变性、退火、延伸步骤与相应循环数）。所有PCR实验流程均包含94℃下3分钟的初始预热步骤，以及72℃下10分钟的最终延伸步骤。
基因座 引物名称 序列（5’→3’） 参考文献 PCR反应程序
16S 16Sar-L CGCCTGTTTATCAAAAACAT Palumbi等（1991） 30个循环：94℃（45秒）、53℃（45秒）、72℃（1分钟）
16S 16Sbr-H-R CCGGTCTGAACTCAGATCACGTC - 同上述16S基因座PCR程序
cytb L14910 GACCTGTGATMTGAAAACCAYCGTTGT Burbrink等（2000） 94℃（1分钟）、58℃（1分钟）、72℃（2分钟），循环数30~36
cytb H16064 CTTTGGTTTACAAGAACAATGCTTT - 同上述cytb基因座PCR程序
AND4 ND4 CACCTATGACTACCAAAAGCTCATGTAGAAGCA Révalo等（1994） 94℃（25秒）、56℃或60℃（1分钟）、72℃（2分钟），循环数25~30
- Leu CATTACTTTTACTTGGATTTGCACCA - 未标注
- S78 CCTTGGGTGTGATTTTCTCACCT - 未标注