APPENDIX 3 in The Amidella clade in Europe (Basidiomycota: Amanitaceae): clarification of the contentious Amanita valens (E. - J. Gilbert) Bertault and the importance of taxon-specific PCR primers for identification

APPENDIX 3. — Usefulness of the taxon-specific primers for the generation of PCR amplicons from herbarium specimens’ DNA. ITS-I and ITS-II represent the first and second nrDNA intron, respectively, and LSU represents the proximal region of the 26S nrDNA. a, https://sites.duke.edu/vilgalyslab/rdna_primers_for_fungi (accessed on May 15 th 2021). TaxonSpecimenITS-IITS-IILSUCommentAmanita lepiotoidesG08ITS1F- Ale Ir1Ale If1-ITS4BaLR0R- Ale Lr1–f. subcylindrosporaAle Lf1-LR3aAle Lf1-LR5Amanita ponderosaG73Apo If1-ITS2_KYO2Apo If2-ITS4NLC2R- Apo Lr1–f. valensAmanita pseudovalens G74SR6Ra- Aps Ir1Aps If1-NLC2Aps Lf1- Aps Lr2–comb. nov.MPU1ITS1F- Aps Ir1Aps If1-ITS4LR0R- Aps LR1All regions afterNLC2R- Aps Lr2reamplificationMPU2SR6R- Aps Ir1Aps If1-ITS4Aps Lf1- Aps Lr2ITS-II region afterreamplification附录3. 分类群特异性引物用于从蜡叶标本DNA中扩增聚合酶链式反应（PCR）产物的有效性。内转录间隔区I（ITS-I）与内转录间隔区II（ITS-II）分别代表核核糖体DNA（nrDNA）的第一、第二内含子，大亚基（LSU）则代表26S核核糖体DNA的近端区域。注a：https://sites.duke.edu/vilgalyslab/rdna_primers_for_fungi（访问时间：2021年5月15日）。 1. 鳞柄鹅膏（Amanita lepiotoides），标本编号G08：ITS-I区域引物为ITS1F- Ale Ir1、Ale If1-ITS4；ITS-II区域无可用引物；LSU区域引物为BaLR0R- Ale Lr1 f. subcylindrospora、Ale Lf1-LR3a、Ale Lf1-LR5；无备注。 2. 重固鹅膏（Amanita ponderosa），标本编号G73：ITS-I区域引物为Apo If1-ITS2_KYO2、Apo If2-ITS4；ITS-II区域无可用引物；LSU区域引物为NLC2R- Apo Lr1 f. valens；无备注。 3. 假亚绒盖鹅膏（Amanita pseudovalens），标本编号G74：ITS-I区域引物为SR6Ra- Aps Ir1、Aps If1-NLC2；ITS-II区域无可用引物；LSU区域引物为Aps Lf1- Aps Lr2（新组合comb. nov.）；无备注。 4. 假亚绒盖鹅膏（Amanita pseudovalens），标本编号MPU1：ITS-I区域引物为ITS1F- Aps Ir1、Aps If1-ITS4；ITS-II区域无可用引物；LSU区域引物为LR0R- Aps LR1、NLC2R- Aps Lr2；备注为所有区域经再扩增后。 5. 假亚绒盖鹅膏（Amanita pseudovalens），标本编号MPU2：ITS-I区域引物为SR6R- Aps Ir1、Aps If1-ITS4、Aps Lf1- Aps Lr2；ITS-II区域经再扩增；LSU区域无可用引物；无备注。