Microalgal Colony Blot: a simple and rapid method for direct detection of recombinant protein production in microalgae colonies

Supporting Data for Microalgal colony blot: a simple and rapid method for direct detection of recombinant proteins in microalgae Torres-Tiji Y., Fields F., Mayfield S. P. (2025)PLOS ONE Contents Plasmid Sequences GenBank (.gbk) and SnapGene (.dna) formats are provided for all plasmids. mCloverGFP expression plasmid (.gbk, .dna)Ble-mCloverGFP fusion expression vector used for primary screening ICAM1 expression plasmid (.gbk, .dna)Ble-ICAM1 fusion expression vector (FLAG-tagged) CtxB-RBD expression plasmid (.gbk, .dna)Cholera toxin subunit B fused to SARS-CoV-2 spike protein RBD RBD-mClover secreted expression plasmid (.gbk, .dna)RBD-mClover fusion with secretion signal RBD-mClover ER-retained expression plasmid (.gbk, .dna)RBD-mClover fusion with ER retention signal Flow Cytometry Data Flow cytometry standard (.fcs, version 3.0) files acquired on a CytoFLEX (Beckman Coulter) using CytExpert 2.4. Wild-type controlsWT1.fcs, WT2.fcs High-expressing clonesH1.fcs, H2.fcs, H3.fcs Medium-expressing clonesM1.fcs, M2.fcs, M3.fcs Low-expressing clonesL1.fcs, L2.fcs, L3.fcs Gated cell populations (.xlsx)Exported scale values for gated populations used in analysis Acquisition settings (identical for all samples): FL1 (GFP FITC): Gain 60; Ex 488 nm; Em 525/40 nm FL3 (Auto APC): Gain 600; Ex 638 nm; Em 660/10 nm FSC/SSC: Gain 500; Threshold 50,000 / 10,000 Original Blot Images Uncropped, unadjusted original images provided in compliance with PLOS ONE data-availability requirements. Figure 1 Panel A – original picture (.JPG) Panel B – original picture (.JPG) Panel C – original picture (.JPG) Panel D – original picture (.JPG)Microalgal colony blot development time series Figure 2 Original picture (.JPG)western blot validation of selected clones Figure 5 Panel A – ICAM1 MCB algae original picture (.JPG)ICAM1-expressing colonies on plate Panel B – ICAM1 MCB original picture (.JPG)ICAM1 microalgal colony blot Panel C – RBD MCB algae original picture (.JPG)RBD-expressing colonies on plate Panel D – RBD MCB original picture (.JPG)RBD microalgal colony blot Panel E – MCB C. pacifica algae original picture (.JPG)C. pacifica colonies on plate Panel F – MCB C. pacifica original picture (.JPG)C. pacifica microalgal colony blot Figure S2 Anti-RBD western blot original picture (.JPG) Anti-CtxB western blot original picture (.JPG) File Formats .gbk — GenBank format (SnapGene, Benchling, ApE, UGENE) .dna — SnapGene format (annotations preserved; free viewer available) .fcs — Flow Cytometry Standard 3.0 (FlowJo, CytExpert, FCS Express) .xlsx — Microsoft Excel format .JPG — JPEG image format Contact Corresponding author:Yasin Torres-Tiji Colorado School of Mines / UC San Diego [e-mail]/[e-mail]配套支撑数据 论文标题：《微藻菌落印迹：一种用于微藻中重组蛋白直接检测的简便快速方法》 作者：Torres-Tiji Y.、Fields F.、Mayfield S. P.（2025），刊载于《PLOS ONE》 ## 内容清单 1. 质粒序列 所有质粒均提供GenBank（.gbk）和SnapGene（.dna）格式文件： - mCloverGFP表达质粒（.gbk、.dna）：用于初筛的Ble-mCloverGFP融合表达载体 - ICAM1表达质粒（.gbk、.dna）：带FLAG标签的Ble-ICAM1融合表达载体 - CtxB-RBD表达质粒（.gbk、.dna）：与SARS-CoV-2刺突蛋白受体结合结构域（RBD）融合的霍乱毒素B亚基载体 - RBD-mClover分泌型表达质粒（.gbk、.dna）：带有分泌信号肽的RBD-mClover融合表达载体 - RBD-mClover内质网滞留型表达质粒（.gbk、.dna）：带有内质网滞留信号肽的RBD-mClover融合表达载体 2. 流式细胞术数据 流式细胞术标准（Flow Cytometry Standard, .fcs，3.0版）文件均通过CytoFLEX（贝克曼库尔特，Beckman Coulter）设备，使用CytExpert 2.4软件采集。具体分组如下： - 野生型对照：WT1.fcs、WT2.fcs - 高表达克隆：H1.fcs、H2.fcs、H3.fcs - 中表达克隆：M1.fcs、M2.fcs、M3.fcs - 低表达克隆：L1.fcs、L2.fcs、L3.fcs - 门控细胞群体数据（.xlsx）：分析中使用的门控群体的标准化导出值 - 采集参数（所有样本均保持一致）： * FL1（GFP FITC）：增益60；激发波长488 nm；发射波长525/40 nm * FL3（自发荧光APC）：增益600；激发波长638 nm；发射波长660/10 nm * 前向散射光/侧向散射光（FSC/SSC）：增益500；阈值分别为50,000、10,000 3. 原始印迹图像 所有未裁剪、未调整的原始图像均符合《PLOS ONE》的数据共享要求，具体如下： - 图1：微藻菌落印迹发育时间序列 - 面板A——原始图像（.JPG） - 面板B——原始图像（.JPG） - 面板C——原始图像（.JPG） - 面板D——原始图像（.JPG） - 图2：选定克隆的蛋白质免疫印迹验证结果 - 原始图像（.JPG） - 图5： - 面板A——ICAM1 MCB藻类原始图像（.JPG）：平板上的ICAM1表达菌落 - 面板B——ICAM1 MCB原始图像（.JPG）：ICAM1微藻菌落印迹 - 面板C——RBD MCB藻类原始图像（.JPG）：平板上的RBD表达菌落 - 面板D——RBD MCB原始图像（.JPG）：RBD微藻菌落印迹 - 面板E——MCB C. pacifica藻类原始图像（.JPG）：平板上的C. pacifica菌落 - 面板F——MCB C. pacifica原始图像（.JPG）：C. pacifica微藻菌落印迹 - 补充图S2： - 抗RBD蛋白质免疫印迹原始图像（.JPG） - 抗CtxB蛋白质免疫印迹原始图像（.JPG） 4. 文件格式说明 - .gbk：GenBank格式（可通过SnapGene、Benchling、ApE、UGENE软件读取） - .dna：SnapGene格式（保留全部注释信息，提供免费查看工具） - .fcs：流式细胞术标准3.0格式（可通过FlowJo、CytExpert、FCS Express软件读取） - .xlsx：微软Excel（Microsoft Excel）格式 - .JPG：JPEG图像格式 5. 联系方式 通讯作者：Yasin Torres-Tiji 所属机构：科罗拉多矿业学院（Colorado School of Mines）/ 加州大学圣地亚哥分校（UC San Diego） 电子邮箱：[e-mail] / [e-mail]